Suwuk hromatografiýa, her bir komponentiň mazmunyny we çig maldaky, araçy, taýýarlyk we gaplaýyş materiallaryndaky hapalary barlamak üçin esasy usuldyr, ýöne köp maddalara bil baglamak üçin standart usullar ýok, şonuň üçin täze usullary işläp düzmek gutulgysyz. Suwuk fazaly usullaryň işlenip düzülmeginde, hromatografiki sütün suwuk hromatografiýanyň özenidir, şonuň üçin laýyk hromatografiki sütüni nädip saýlamaly. Bu makalada awtor üç tarapdan suwuk hromatografiýa sütünini nädip saýlamalydygyny düşündirer: umumy pikirler, pikirler we amaly çäkler.
A. Suwuk hromatografiýa sütünlerini saýlamak üçin umumy pikirler
1. Analitigiň fiziki we himiki aýratynlyklaryna baha beriň: himiki gurluş, çözüliş, durnuklylyk (meselem, okislenmek / azaltmak / gidrolizlemek aňsatmy), kislotalylyk we aşgarlyk we ş.m. esasanam himiki gurluş esasydyr. häsiýetleri kesgitlemekde faktor, meselem, birleşdirilen topar güýçli ultramelewşe siňdirişine we güýçli floresanlyga eýe;
2. Derňewiň maksadyny kesgitläň: ýokary aýralyk, sütüniň ýokary netijeliligi, gysga derňew wagty, ýokary duýgurlyk, ýokary basyşa garşylyk, uzyn sütün ömri, arzan baha we ş.m. zerurmy;
- Amatly hromatografiki sütüni saýlaň: bölejikleriň ululygy, gözenegiň ululygy, temperatura çydamlylygy, pH çydamlylygy, analitigiň adsorbsiýasy we ş.m. ýaly hromatografiki doldurgyçyň düzümine, fiziki we himiki aýratynlyklaryna düşüniň.
- Suwuk hromatografiýa sütünlerini saýlamak üçin pikirler
Bu bapda, hromatografiýa sütüniniň fiziki we himiki aýratynlyklary nukdaýnazaryndan hromatografiýa sütünini saýlanyňyzda göz öňünde tutulmaly faktorlar ara alnyp maslahatlaşylar. 2.1 Dolduryjy matrisa
2.1.1 Silisiýa gel matrisasy Suwuk hromatografiýa sütünleriniň köpüsiniň doldurgyç matrisasy silisiýa jelidir. Dolduryjynyň bu görnüşi ýokary arassalygy, arzan bahasy, ýokary mehaniki güýji bar we toparlary üýtgetmek aňsat (fenil baglanyşygy, amin baglanyşygy, siano baglanyşygy we ş.m.), ýöne çydam edýän pH bahasy we temperatura diapazony çäklidir: Silisiýa gel matrisa doldurgyçlarynyň köpüsiniň pH diapazony 2-den 8-e çenli, ýöne ýörite üýtgedilen kremniy gel bilen baglanyşdyrylan fazalaryň pH diapazony 1,5-den 10-a çenli giň bolup biler, şeýle hem pes pH-de durnukly ýörite üýtgedilen kremniy jel baglanyşyk fazalary bar, pH 1-den 8-e çenli durnukly Agilent ZORBAX RRHD stabilbond-C18 ýaly; Silisiýa gel matrisasynyň ýokarky temperatura çäkleri adatça 60 is, käbir hromatografiýa sütünleri ýokary pH-de 40 a temperatura çydap bilýärler.
2.1.2 Polimer matrisa Polimer doldurgyçlary esasan polistirol-divinilbenzol ýa-da polimetakrilatdyr. Olaryň artykmaçlyklary, giň pH diapazonyna çydap bilmekleri - 1 bilen 14 aralygynda ulanylyp bilner we ýokary temperatura has çydamlydyr (80 ° C-den ýokary bolup biler). Silisiýa esasly C18 doldurgyçlary bilen deňeşdirilende, bu doldurgyçyň has güýçli gidrofobiýasy bar we makropor polimer beloklar ýaly nusgalary bölmekde örän täsirli. Adetmezçilikleri sütüniň netijeliliginiň pes bolmagy we mehaniki güýji kremniniň esasly doldurgyçlaryndan has gowşaklygydyr. 2.2 Bölejikleriň görnüşi
Häzirki zaman HPLC doldurgyçlarynyň köpüsi sferik bölejikler, ýöne käwagt tertipsiz bölejiklerdir. Sferiki bölejikler aşaky sütün basyşyny, sütüniň ýokary netijeliligini, durnuklylygyny we uzak ömrüni üpjün edip biler; visokary ýapyşykly ykjam fazalary ulananyňyzda (fosfor kislotasy ýaly) ýa-da nusga çözgüdi ýelimli bolanda, tertipsiz bölejikler has uly ýer meýdanyna eýe bolup, bu iki fazanyň doly hereketine has amatly we bahasy birneme pesdir. 2.3 Bölejikleriň ululygy
Bölejikleriň göwrümi näçe kiçi bolsa, sütüniň netijeliligi we bölünişi şonça ýokary, ýöne ýokary basyşa garşylyk şonça-da erbetdir. Iň köp ulanylýan sütün 5 mμ bölejik ölçeg sütüni; aýralyk talaby ýokary bolsa, käbir çylşyrymly matrisa we köp komponentli nusgalaryň bölüniş meselesini çözmäge amatly 1,5-3 μm doldurgyç saýlanyp bilner. UPLC 1,5 μm doldurgyç ulanyp biler; 10 μm ýa-da has uly bölejik ölçeg doldurgyçlary köplenç ýarym taýýarlyk ýa-da taýýar sütünler üçin ulanylýar. 2.4 Uglerodyň düzümi
Uglerodyň düzümi, belli bir ýer meýdany we baglanyşyk fazasy bilen baglanyşykly silisiýa jeliniň üstündäki baglanyşyk fazasynyň paýyna degişlidir. Carbonokary uglerod düzümi ýokary sütün kuwwatyny we ýokary çözgüdi üpjün edýär we köplenç ýokary bölünmegi talap edýän çylşyrymly nusgalar üçin ulanylýar, ýöne iki fazanyň arasyndaky uzak täsirleşme wagty sebäpli derňew wagty uzyn; pes uglerodly hromatografiki sütünleriň has gysga derňew wagty bar we dürli saýlamalary görkezip bilýär we köplenç çalt derňewi we ýokary suwly faza şertlerini talap edýän ýönekeý nusgalar üçin ulanylýar. Adatça, C18 uglerodyň düzümi 7% -den 19% -e çenli. 2.5 Gözenegiň ululygy we belli bir meýdany
HPLC adsorbsion serişdesi gözenekli bölejikler bolup, özara täsirleriň köpüsi gözeneklerde bolýar. Şonuň üçin molekulalar adsorbsiýa we bölünmek üçin gözeneklere girmeli.
Gözenegiň ululygy we aýratyn ýer meýdany iki sany goşmaça düşünje. Ownuk gözenegiň ululygy, belli bir uly meýdany aňladýar we tersine. Uly belli bir ýer meýdany, molekulalar bilen baglanyşyk fazalarynyň özara täsirini artdyryp, saklamagy güýçlendirip, nusga ýüklenişini we sütün kuwwatyny we çylşyrymly komponentleriň bölünmegini artdyryp biler. Doly gözenekli doldurgyçlar bu doldurgyçlara degişlidir. Aýralyk talaplary ýokary bolanlar üçin uly meýdany bolan doldurgyçlary saýlamak maslahat berilýär; ownuk aýratyn ýer meýdany arka basyşyny peseldip, sütüniň netijeliligini ýokarlandyryp we gradient derňewi üçin amatly deňagramlylygy azaldyp biler. Esasy gabyk doldurgyçlary bu doldurgyçlara degişlidir. Aýralygy üpjün etmek şertinde, ýokary derňew netijeliligi talaplary bolanlar üçin kiçi meýdany bolan doldurgyçlary saýlamak maslahat berilýär. 2.6 Gözenegiň göwrümi we mehaniki güýji
Gözenegiň göwrümi, “gözenegiň göwrümi” diýlip hem atlandyrylýar, bir bölejikdäki boşlugyň göwrümine degişlidir. Dolduryjynyň mehaniki güýjüni gowy görkezip biler. Uly gözenek göwrümi bolan doldurgyçlaryň mehaniki güýji ownuk gözenek göwrümi bolan doldurgyçlardan birneme gowşak. Gözenegiň göwrümi 1,5 ml / g-den az ýa-da deň bolan doldurgyçlar esasan HPLC bölünişi üçin ulanylýar, gözenegiň göwrümi 1,5 ml / g-den köp bolan doldurgyçlar esasan molekulýar çykaryş hromatografiýasy we pes basyşly hromatografiýa üçin ulanylýar. 2.7 Tutmagyň derejesi
Tutmak, birleşmeleriň we açyk silanol toparlarynyň özara täsiri netijesinde dörän guýruk derejelerini azaldyp biler (meselem, gidroksidi birleşmeler bilen silanol toparlarynyň arasyndaky ion baglanyşygy, van der Waals güýçleri we kislotaly birleşmeler bilen silanol toparlarynyň arasyndaky wodorod baglanyşyklary), şeýlelik bilen sütüniň netijeliligini we pik görnüşini ýokarlandyryp biler. . Baglanmadyk baglanyşyk fazalary, esasanam polýar nusgalary üçin ýapylan baglanyşyk fazalaryna görä dürli saýlamalary döreder.
- Dürli suwuk hromatografiýa sütünleriniň ulanylyş gerimi
Bu bap, käbir ýagdaýlarda dürli görnüşli suwuk hromatografiýa sütünleriniň ulanylyş çägini beýan eder.
3.1 Ters fazaly C18 hromatografiki sütün
C18 sütüni, iň köp ulanylýan ters fazaly sütün bolup, organiki maddalaryň köpüsiniň mazmuny we haramlyk synaglaryna laýyk bolup biler we orta polýar, gowşak polýar we polýar däl maddalara degişlidir. C18 hromatografiki sütüniň görnüşi we spesifikasiýasy aýratyn aýralyk talaplaryna laýyklykda saýlanmalydyr. Mysal üçin, ýokary aýralyk talaplary bolan maddalar üçin köplenç 5 μm * 4,6 mm * 250 mm spesifikasiýa ulanylýar; çylşyrymly bölüniş matrisalary we şuňa meňzeş polýarlygy bolan maddalar üçin 4 μm * 4,6 mm * 250 mm spesifikasiýa ýa-da kiçi bölejik ululyklary ulanylyp bilner. Mysal üçin, awtor celecoxib API-de iki genotoksiki hapalygy ýüze çykarmak üçin 3 μm * 4,6 mm * 250 mm sütün ulandy. Iki maddanyň bölünişi 2,9-a ýetip biler, bu gaty gowy. Mundan başga-da, aýralygy üpjün etmek şerti bilen, çalt derňew zerur bolsa, köplenç 10 mm ýa-da 15 mm gysga sütün saýlanýar. Mysal üçin, awtor piperakin fosfat API-de genotoksiki haramlygy ýüze çykarmak üçin LC-MS / MS ulananda, 3 μm * 2.1 mm * 100 mm sütün ulanyldy. Haramlyk bilen esasy komponentiň arasyndaky tapawut 2.0 boldy we bir nusgany tapmak 5 minutda tamamlanyp bilner. 3.2 Ters fazaly fenil sütüni
Fenil sütüni ters fazaly sütüniň bir görnüşidir. Sütüniň bu görnüşi ysly birleşmeler üçin güýçli seçimlilige eýedir. Adaty C18 sütüni bilen ölçelýän ysly birleşmeleriň täsiri gowşak bolsa, fenil sütünini çalyşmagy göz öňünde tutup bilersiňiz. Mysal üçin, “celecoxib API” ýasaýarkam, şol bir öndürijiniň fenil sütüni bilen ölçelýän esasy komponent jogaby we şol bir spesifikasiýa (hemmesi 5 μm * 4,6 mm * 250 mm) C18 sütüninden takmynan 7 esse köpdi. 3.3 Adaty fazaly sütün
Ters fazaly sütüne täsirli goşundy hökmünde adaty fazaly sütün ýokary polýar birleşmeler üçin amatlydyr. Ters fazaly sütündäki 90% -den gowrak suw fazasy bilen uzaldylanda, hatda çözüji pik bilen ýakyn we biri-birine gabat gelse, adaty fazaly sütüni çalyşmagy göz öňünde tutup bilersiňiz. Sütüniň bu görnüşine depe sütüni, amin sütün, siano sütüni we ş.m. girýär.
3.3.1 Hil sütüni Hilik sütüni, adatça polýar maddalara täsirini güýçlendirmek üçin baglanan alkil zynjyrynda gidrofil toparlary öz içine alýar. Sütüniň bu görnüşi şeker maddalaryny derňemek üçin amatlydyr. Authorazyjy ksilozanyň mazmuny we şuňa meňzeş maddalar we olardan emele gelen mahaly sütüniň bu görnüşini ulandy. Ksiloza önüminiň izomerleri hem gowy bölünip bilner;
3.3. şekerleri, aminokislotalary, esaslary we amidleri bölmek üçin; sian sütüni, birleşdirilen baglanyşyklaryň bolmagy sebäpli wodorodlaşdyrylan we wodorodsyz gurluşly şuňa meňzeş maddalary aýyranda has gowy saýlamaga eýe. Amin sütüni we siano sütüni köplenç adaty faza sütüni bilen ters faza sütüniniň arasynda üýtgedilip bilner, ýöne ýygy-ýygydan kommutasiýa maslahat berilmeýär. 3.4 Şir sütüni
Şir sütüni, adyndan görnüşi ýaly, şir birleşmelerini bölmek we derňemek üçin, esasanam farmasewtika pudagy üçin amatlydyr. Adaty ters faza we adaty faza sütünleri izomerleriň bölünmegine ýetip bilmese, sütüniň bu görnüşine seredilip bilner. Mysal üçin, awtor 1,2-difeniletilenediaminiň iki izomerini bölmek üçin 5 μm * 4,6 mm * 250 mm şir sütünini ulandy: (1S, 2S) -1, 2-difeniletilenediamin we (1R, 2R) -1, 2 -Difeniletilenediamin we ikisiniň arasyndaky aýralyk takmynan 2,0-a ýetdi. Şeýle-de bolsa, şir sütünleri beýleki sütünlerden has gymmat, adatça 1W + / bölek. Şeýle sütünlere zerurlyk bar bolsa, bölüm ýeterlik býudjet düzmeli. 3.5 Ion alyş sütüni
Ion alyş-çalyş sütünleri, ionlar, beloklar, nuklein kislotalary we käbir şeker maddalary ýaly zarýadly ionlary bölmek we derňemek üçin amatlydyr. Dolduryjy görnüşine görä, olar kation alyş-çalyş sütünlerine, anion alyş sütünlerine we güýçli kation alyş-çalyş sütünlerine bölünýärler.
Kation alyş-çalyş sütünlerine esasan aminokislotalar ýaly kationiki maddalary seljermek üçin amatly kalsiý we wodorod esasly sütünler girýär. Mysal üçin, awtor kalsiý glýukonaty we kalsiý asetaty ýuwýan erginde analiz edende kalsiý esasly sütünleri ulandy. Iki maddada λ = 210nm güýçli seslenme bardy we aýralyk derejesi 3.0-e ýetdi; awtor glýukoza bilen baglanyşykly maddalary seljerende wodorod esasly sütünleri ulandy. Birnäçe möhüm baglanyşykly maddalar - maltoza, maltotrioza we fruktoza - diferensial detektorlarda ýokary duýgurlyga eýe, kesgitleme çäkleri 0,5 ppm-den pes we aýralyk derejesi 2.0-2.5.
Anion alyş-çalyş sütünleri esasan organiki kislotalar we galogen ionlary ýaly anion maddalary derňemek üçin amatlydyr; Güýçli kation alyş-çalyş sütünleri has ýokary ion alyş-çalyş ukybyna we saýlama ukybyna eýedir we çylşyrymly nusgalary bölmek we derňemek üçin amatlydyr.
Aboveokardakylar, awtoryň başdan geçirenleri bilen utgaşdyrylan birnäçe umumy suwuk hromatografiýa sütünleriniň görnüşleri we ulanylyş aralygy. Hakyky amaly programmalarda beýleki gözenekli hromatografiki sütünler, kiçi gözenekli hromatografiki sütünler, ýakyn hromatografiýa sütünleri, multimodly hromatografiki sütünler, aşa ýokary öndürijilikli suwuk hromatografiýa sütünleri (UHPLC), aşa suwuk hromatografiýa sütünleri bar. SFC) we ş.m. Dürli ugurlarda möhüm rol oýnaýarlar. Hromatografiki sütüniň aýratyn görnüşi, nusganyň gurluşyna we aýratynlyklaryna, aýralyk talaplaryna we beýleki maksatlara görä saýlanmalydyr.
Iş wagty: Iýun-14-2024